【摘要】 目的：研究儿童遗传性代谢病在筛查过程中应用串联质谱技术的临床效果。方法：对笔者所在医院儿科门诊常规筛查的267例儿童进行分析，通过足跟采集血液，将其滴注在采血滤纸上，干血滤纸片与已经含有已知量的酰基肉碱、氨基酸同位素内标一起，通过甲醇萃取，盐酸正丁醇衍生之后，通过串联质谱仪对血片中酰基肉碱谱及氨基酸谱浓度进行分析。结果：通过对所选的267例标本急性分析，4例标本检出为阳性，占1.4%，其中2例为甲基丙二酸血症，1例为希特林蛋白缺乏症，1例为异戊酸血症。结论：串联质谱技术能够对45种遗传性代谢病进行检测，包括有机酸代谢紊乱、氨基酸代谢紊乱以及脂肪酸代谢紊乱性疾病，对儿童开展遗传性代谢病的筛查具有重要的价值。
【关键词】 串联质谱技术； 儿童遗传性代谢病； 筛查； 应用价值
中图分类号 R725.8 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）27-0061-02
doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.27.029
提升出生人口素质是现今预防医学中非常关注的问题。先天性遗传代谢病的新生儿临床上主要表现为激素水平、体内生化水平改变[1]。对儿童实施先天性遗传代谢病筛查工作，能够在疾病出现之前，早期做出明确诊断，有利于疾病采取早期的治疗措施。随着新生儿疾病筛查的不断进步，能够用于筛查的技术手段逐渐增多。近些年，串联质谱技术逐渐的应用于临床，这让遗传代谢病的筛查效率得到了更多的检出概率，而且逐渐的扩展了筛查疾病的类型，实现了一种实验检查多种疾病的要求，明显提升了实验的准确性和有效率[2]。
1 资料与方法
1.1 一般资料
对笔者所在医院儿科门诊体检的患儿和家属解释后同意进行遗传代谢疾病筛查的267例儿童进行分析，其中143例为男性，124例为女性；年龄7 d～5个月；临床怀疑患有遗传性代谢病高危儿童的临床表现具体包括生长发育迟缓、智力落后、肌张力异常、精神行为异常、肝脾肿大、黄疸、抽搐、反复呕吐，还包括一些实验室症状，如低血糖、代谢性酸中毒等。
1.2 方法
通过足跟采集血液，将其滴注在采血滤纸上，干血滤纸片与已经含有已知量的酰基肉碱、氨基酸同位素内标一起，通过甲醇萃取，盐酸正丁醇衍生之后，通过串联质谱仪对血片中酰基肉碱谱及氨基酸谱浓度进行分析。
串联质谱技术主要是将被测物质通过分子电离成为各种质荷比（m/z）不同的带电粒子，之后运用电磁学原理，依据其所形成的离子峰、谱图强度定量和坚定分析物[3]。串联质谱则是通过两个MS通过碰撞室（CID）串联形成的，通过多样品离子进行检测的特定质荷比实施定性分析，运用同位素内标实施定量分析，明显提升了方法的灵敏度和特异性，能够同时检测30多种疾病的指标无以此来说明多种或者某一种遗传代谢病的发生。
2 结果
通过对所选的267例标本急性分析，4例标本检出为阳性，占1.4%，其中2例为甲基丙二酸血症，1例为希特林蛋白缺乏症，1例为异戊酸血症。
3 讨论
遗传代谢性疾病（IMD）种类很多，到目前为止已经发现的疾病已有1000多种。大部分患者的临床表现是非特异性的，包括嗜睡、呕吐、呼吸困难、发育迟缓及酸中毒等等。过去经常应用的IMD筛查方法有放射免疫分析法、Guthrie细菌抑制法都为一种实验检验一种疾病[5]。随着筛查疾病方法不断的增多，开展的检查项目也在逐渐增多，因而运用传统的筛查方法成本高、工作量大，已经不能满足大规模IMD筛查的需求[6]。
上海新华医院顾学范等第一次对104例临床诊断可能为遗传性代谢病的儿童，运用串联质谱分析血片中酰基肉碱谱和氨基酸谱及其浓度[7]。结果阳性标本10例（9.6%），其中3例氨基酸代谢病（AAD）；4例脂肪酸代谢病（FAOD）；3例有机酸代谢病（OAD）。初步试验表明MS/MS能够用于检测40多种遗传性代谢病[8]。
串联质谱技术是通过检测样品中物质的质荷比（相对分子质量）对物质进行定性和定量分析，可同时检测一滴血中70余种氨基酸和酰基肉碱，可以对40余种氨基酸和有机酸脂肪酸代谢性疾病进行快速的筛查和诊断，目前已有许多国家利用串联质谱进行新生儿筛查及临床疑似患者检测，使相关疾病的患病发现率显著增加。我国2002年开始使用串联质谱进行遗传代谢病儿童筛查和临床疑似遗传代谢病患者的检测，也使得我国的遗传代谢性疾病的筛查、诊断和治疗有了显著提高。
我国台湾运用MS/MS在2000-2009年筛查了1 495 132例新生儿，其中170例得到确诊，发病率为1/6219。其中107例为AAD，51例为OAD，12例为FAOD。在中国大陆地区，上海新华医院从2003年开始运用MS/MS对30多万例新生儿进行筛查，共筛查出74例涉及到14种遗传代谢病，阳性率为1/3650。同时建立了MS/MS检测干血滤纸片中氨基酸的方法[9]。2010年卫生部门在《新生儿疾病筛查技术规范》中指出将MS/MS用到新生儿疾病筛查中。广州、上海、济南等地区逐渐的开始应用MS/MS对新生儿疾病进行筛查，其他较大的筛查中心也逐步的或者正在准备实施这项技术检查，在以后的过程中将在全国范围内开展。
虽然MS/MS具有很多优势，但是并没有将传统的检查方法完全取代。另外，MS/MS在IMD中的运用还具有下述几点困惑：（1）与普通疾病相比较，大部分遗传代谢病比较少，能够取得的治疗资源相对较少，因而在大多数医疗单位尚无法保证得到相应的治疗服务。（2）质谱仪价格昂贵，串联质谱仪的维持和操作费用相对较高，大约每次筛查需要几千美元[10]。（3）因串联质谱检测出的一些代谢病，常规喂养在短时间内就会引起急性死亡和发病，因而从新生儿的出生和诊断的时间逐渐缩短，最好控制在5 d内。传统采血时间应在72 h之后，是否需要提前采血时间，这还需要进一步进行验证。
随着人们对IMD机理认识的逐渐加深，及串联质谱技术的逐渐成熟，能够对更多的疾病能够通过MS/MS实施筛查分析。让新筛能够增加检出遗传性代谢疾病的种类，早期进行治疗和诊断[11]。现今我国经济相对发达，各个地区正在逐渐的开展串联质谱新生儿筛查，想要建立我国串联质谱新生儿筛查技术规范及其对相关检测疾病的诊治常规。在以后的工作中需要继续努力，引入二级检测方案，包括更多标志标志物，基恩人降低假阳性，同时提升筛查的阳性预测值[12]。MS/MS除了用于有机酸代谢紊乱、氨基酸病和脂肪酸氧化缺陷筛查以外，还能够对羊水中的酰基肉碱或者氨基酸进行产前检查，，也可以用到溶酶体活性、类固醇激素等其他代谢物的检测。但笔者相信随着科学技术的不断发展，串联质谱技术会越来越成熟和稳定，对遗传性代谢病的诊断阳性率更高，能够得到更高的社会效益。
参考文献
[1]刘伟.串联质谱—新生儿疾病筛查技术的发展趋势[J].中国妇幼卫生杂志，2011，24（1）：458-459.
[2] Dau-Ming Niu，Yin-Hsiu Chien，Chuan-Chi Chiang，et al.Nationwide survey of extended newborn screening by tandem mass spectrometry in Taiwan[J].Journal of Inherited Metabolic Disease，2010，12（2）：185-186.
[3]林剑军.婴幼儿遗传代谢性疾病的临床、影像学特点及串联质谱筛查[J].山东医药，2013，34（47）：642-643.
[4]王立娟，管小琴，刘琳，等.小儿遗传代谢性肝病的临床病理分析[J].临床儿科杂志，2010，48（6）：541-542.
[5]王昕，杨健，王立文，等.以癫痫为主要表现的儿童遗传代谢性疾病[J].山东医药，2012，20（8）：36-37.
[6]刘志峰，郭红梅，练敏，等.应用尿液气相色谱-质谱分析法筛查儿童遗传代谢性肝病的临床意义[J].实用儿科临床杂志，2010，22（8）：175-176.
[7]韩炳娟，韩炳超，邹卉.串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用[J].中国妇幼保健，2013，24（29）：410-412.
[8]许碧华，许琛，王丽姝，等.溶酶体铁代谢异常与肾脏损伤[J].中国医学创新，2013，10（16）：56-57.
[9]麻宏伟.出生缺陷及常见遗传代谢性疾病的筛查及干预[J].中国儿童保健杂志，2013，34（4）：649-650.
[10]许永福，饶志.串联质谱技术在新生儿遗传性代谢疾病筛查中的应用进展[J].甘肃医药，2012，6（11）：401-402.
[11]胡建秀，辛虹.串联质谱技术筛查新生儿遗传代谢疾病120例[J].现代中西医结合杂志，2011，22（26）：61-62.
[12]王洪允，江骥，胡蓓.串联质谱在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用[J].质谱学报，2011，33（1）：340-341.
（收稿日期：2015-05-29） （编辑：何玉勤）
