[摘要] 目的 探究Wnt2、dvl蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法 整群收集2014年12月—2015年12月该院确诊的食道鳞癌手术切除标本131例和131例健康食管组织标本，检测Wnt2、Dvl，分析与临床病理特征关系。结果 在食管鳞癌组织中Wnt2及Dvl阳性率分别为89.3%和 78.2%，正常食管组织中Wnt2及Dvl的阳性率分别为11.9%、8.6%，P<0.05。且有淋巴结转移组织阳性率较高。结论 Wnt2、Dvl蛋白的表达异常可能与食管鳞癌的发生及发展密切相关。
[关键词] Wnt2蛋白；Dvl蛋白；食管鳞癌
[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）07（a）-0033-02
[Abstract] Objective To investigate the Wnt2， DVL protein in esophageal squamous cell carcinoma tissue expression and significance. Methods In December 2014 to December 2015 diagnosed esophageal carcinoma resection specimens of 131 cases and 131 healthy esophageal tissue specimens， detection of Wnt2 and DVL， analysis and clinical pathological features. Results In esophageal squamous cell carcinoma （ESCC） positive rate of Wnt2 and DVL were 89.3% and 78.2%， the positive rate of normal esophageal tissues Wnt2 and DVL were 11.9% 8.6% P < 0.05. And lymph node metastasis tissue the positive rate is high. Conclusion Wnt2， the abnormal expression of Dvl protein may be closely related to the occurrence and development of esophageal squamous cell carcinoma.
[Key words] Dvl protein； Wnt2 protein； Esophageal squamous cell carcinoma
食道癌是常见的消化道恶性肿瘤，在我国十大鳞癌占90%以上。目前食管癌的有效治疗手段主要依赖早期手术，但由于食道癌患者在早期无明显的特异症状，故80%患者发现并就诊时已为晚期[1]。因此明确特异的分子指标用于食管癌的人群筛查，对早期诊断及治疗都有重大意义[2]。该研究采用免疫组织化法检测了2014年12月—2015年12月该院收治的131例食道癌患者的食道鳞癌组织及健康食管组织中的Wnt2、Dvl蛋白的表达，探究其对食道癌发生的影响，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
整群收集2014年12月—2015年12月该院收治的诊断明确为食道鳞癌手术切除标本131例，所有患者均未经放化疗。该次研究均经过所有患者或者其家属知情并同意，并由该院伦理委员会批准实施。其中男79例，女52例，年龄27～79（57.6±11.29）岁。按照2001年国际抗癌联合会修订的TNM分期标准[3]，Ⅰ+Ⅱ期76例，Ⅲ+Ⅳ期55例。其中淋巴结转移76例。同时收集131例健康食管组织作为对照组。两组患者在年龄、性别差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 试剂与方法
1.2.1 主要试剂 山羊抗人Wnt2及Dvl单克隆抗体由美国Santa Cruz公司提供，通用二抗购自上海鲁汶生物科技有限公司。
1.2.2 实验方法 ①1.1中获得的食道鳞癌手术切除标本放置于隔水式60 ℃恒温烘烤12 h；②脱蜡与水化：组织标本在二甲苯中浸泡10 min 2次后，依次用无水乙醇、95%乙醇、70%乙醇分别浸泡5 min；③PBS洗3次，每次5 min，将组织标本置于过氧化氢的甲醇溶液（90%甲醇），室温静置10 min，消除内源性过氧化物酶的影响；④PBS液洗3次各5 min后滴加山羊血清封闭液，室温30 min后倾多余液体；⑤加入适量一抗：Wnt及Dvl，在4℃下过夜，次日在37℃复温45 min后，PBS洗3次各5 min；⑥加入相应的二抗后静置30 min，PBS洗3次各5 min；⑦DAB显色，并在显微镜下观察染色程度，PBS冲洗10 min；⑧苏木精复燃2 min后用不同浓度酒精脱水后冲洗10 min；⑨二甲苯透明、中性树胶封片后，光镜下观察；⑩PBS取代一抗制备的阴性对照
1.3 统计方法
数据统计采用SPSS 19.0统计学软件来完成，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Wnt2及Dvl蛋白在食管鳞癌组织及正常食管组织中的表达
在食管鳞癌组织中Wnt2及Dvl的阳性率分别高于正常食管组织中表达，P<0.05。见表1。
2.2 食管鳞癌组织中Wnt2、Dvl的表达与临床病理特征的关系
Wnt2、Dvl的表达在性别、年龄上不存在显著性差异（P>0.05）；在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期Wnt2及Dvl阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ表达率，P<0.05。在有、无淋巴结转移的病例中Wnt蛋白阳性表达率差异具有统计学意义。
3 讨论
肿瘤的产生与发展过程极其复杂，涉及多种因素及基因，需要经过多个阶段才能最终形成。随着科学技术的发展，癌基因组学及信号通路学等学科的不断发展，人们对细胞癌变的机制认识日趋丰富[4]。目前在人类染色体中已发现19种Wnt基因家族成员，其中Wnt2与食管鳞癌的发生密切相关。当Wnt2信号转导通路被异常激活时， Wnt2蛋白在细胞膜上与跨膜受体结合，结合物可以刺激细胞，激活其中的Dvl。Dvl可以抑制β-catenin与脚手架蛋白、蛋白激酶GSK-3β等结合生成降解化合物，从而避免了β-catenin的降解。当胞质的β-catenin 积累到一定浓度时，可移入细胞核内与核内的TCF/LEF结合，形成β-catenin-TCF/LEF 复合物，该复合物可启动靶基因细胞周期蛋白（cyclin）、基质金属蛋白酶（MMP） -7、干细胞标志物 CD44 等的转录，调控细胞生长[5]。
李韶等[6]研究证实Wnt2经典信号通路及其下游靶基因β-catenin的表达在食管癌的发生发展中起重要作用，且随病理分期的升高表达逐渐增强。该次研究在探讨食管鳞癌组织中Wnt2、Dvl的表达与临床病理特征的关系时也发现：在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期Wnt2及Dvl阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ表达率，P<0.05。在有、无淋巴结转移的病例中Wnt蛋白阳性表达率差异具有统计学意义，P<0.05。与王勇涛等[7]文献中结果一致。王勇涛等研究发现Wnt2、Dvl蛋白在癌组织中的相对表达量明显高于正常组织[8]。该研究结果表明食管鳞癌组织中，Wnt2及Dvl的阳性率分别为88.5%和 77.9%，而正常食管组织中Wnt2及Dvl的阳性率分别为12.2%、8.4%，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。
综上所述，Wnt2与Dvl蛋白质食管鳞癌表达上调过程中表现出高度的一致性，有望成为食管鳞癌诊断和治疗的新型生物标记物。此外TNM分期较晚，Wnt2与Dvl表达量高，易发生淋巴结转移。因此有效抑制Wnt、Dvl的表达，或许可以减少食管鳞癌的发生，为食管鳞癌的预防及治疗提供了新的思路。但是由于Wnt通路涉及多种蛋白，其具体作用与机制还有待于进一步研究。
[参考文献]
[1] 郭变琴，吴立翔，汪先桃，等. Wnt2在乳腺癌组织及患者血清中的表达及意义[J]. 细胞与分子免疫学杂志，2013，29（6）：633-636.
[2] 谢亮海，蒋晗，吴福生.Wnt/β-catenin信号通路在肝细胞癌中的促进作用[J].南方医科大学学报，2014，34（6）：913-917.
[3] 吴国慧，孙莉. Wnt10B在肿瘤和疾病发生中的作用[J].解放军医学院学报，2014，35（11）：1174-1177，1181.
[4] 李华，周德俊. Wnt2/β-catenin信号通路及其在肿瘤中的作用[J]. 广东医学，2015，36（2）：320-323.
[5] 王凯，李建远.Wnt/β-catenin信号通路与发育和疾病研究进展[J].中国医学创新，2012，9（11）：160-161.
[6] 李韶，张云庆，徐飞. Wnt2与β-catenin蛋白在食管癌中的表达特点及病理意义[J]. 大连医科大学学报，2012，34（2）：142-145.
[7] 王勇涛，汪洋，尚自强，等. 食管鳞癌组织中Wnt2、DvlmRNA和蛋白表达变化及意义[J]. 山东医药，2016，56（6）：4-6.
[8] 王勇涛，王洪江，王兴名.Wnt2与Dvl蛋白在食管鳞癌组织中的表达及临床意义[J].天津医药，2016，44（2）：210-212.
（收稿日期：2016-04-05）
