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肝癌患者组织中非编码微核糖核酸-375的表达情况分析

发布时间:2022-10-22 16:30:05 来源:网友投稿

zoޛ)j馝h߾v^;M|n$Mơ对照。观察肝癌组织、癌旁组织中的miR-375表达水平并进行比较。结果 77例肝癌患者的癌组织中miR-375相对表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肝功能Child-pugh分级、体力状况(ECOG)评分、病灶数量、巴塞罗那(BCLC)分期肝癌组织中的miR-375相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤直径≥5 cm肝癌组织中的miR-375相对表达水平低于肿瘤直径<5 cm,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-375相对表达水平与患者的肿瘤直径成负相关(r=-4.521,P<0.05)。结论 肝癌患者组织中miR-375的表达水平同肿瘤直径存在密切关系。

[关键词]肝癌;组织;miR-375;表达水平

[中图分类号] R735.7          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721(2019)12(c)-0029-04

Expression analysis of non-coding microRNA-375 in tissues of patients with liver cancer

ZHANG Ping

Department of Pathology, the Ninth Hospital of Nanchang City, Jiangxi Province, Nanchang   330002, China

[Abstract] Objective To study the expression of non-coding microRNA-375 (miR-375) in tissues of patients with liver cancer. Methods Seventy-seven patients with liver cancer who underwent surgical resection in our hospital from July 2014 to December 2018 were selected as subjects in this study. The non-coding microRNAs (miRNAs) from these cancer patients were extracted. The normal tissues near to cancer ones were selected as control. The expression levels of miR-375 in liver cancer tissues and normal tissues were observed and compared. Results The relative expression level of miR-375 in the cancer tissues of 77 patients with liver cancer was lower than that in the normal tissues, the difference was statistically significant (P<0.05). The relative expression levels of miR-375 in liver cancer tissues of different genders, age, Child-pugh liver function grading, physical status (ECOG) scores, number of lesions, and Barcelona (BCLC) stage were compared, and the differences were not statistically significant (P>0.05). The relative expression level of miR-375 in liver cancer tissues with tumor diameter ≥5 cm was lower than that of tumor diameter <5 cm, and the difference was statistically significant (P<0.05). The relative expression level of miR-375 was negatively correlated with tumor diameter (r=-4.521, P<0.05). Conclusion The expression level of miR-375 in liver cancer patients is closely related to tumor diameter.

[Key words] Liver cancer; Tissue; miR-375; Expression level

肝癌是恶性肿瘤中发病率较高的一种[1],且具有较高的恶性程度,病情发展快且治疗难度大,会对患者的生命安全构成极大的威胁。非编码微核糖核酸(microRNAs,miRNAs)是一类内源性非编码单链小分子RNA[2],其在多种生理、病理过程中,如细胞发育、增殖、分化等,均发挥着显著作用。miRNA具有癌基因、抑癌基因的作用(可扮演癌基因和抑癌基因的角色),其参与了肿瘤的发生及发展[3]。在肝癌患者的肝细胞、外周血清中,有多种miRNA表达的改變存在,异常表达miRNA的发现为临床丰富对肝癌发病机制的认识、探索新的基因靶向治疗方案提供了指导[3]。另外miRNA表达同肝癌的病理类型、恶性程度、分期、分级等病理过程存在密切关系,但不同的miRNA类型在肝癌中所发挥的作用存在差异,本研究选取在我院进行手术切除治疗的77例肝癌患者作为研究对象,旨在分析肝癌组织中非编码微核糖核酸-375(miR-375)的表达情况,现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2014年7月~2018年12月在我院进行手术切除治疗的77例肝癌患者作为研究对象,提取患者癌组织标本中的miRNAs进行考察,以癌旁正常组织作为对照。77例肝癌患者中,男73例,女4例;年龄26~70岁,平均(43.34±2.86)岁;肝功能Child-Pugh分级:A级62例,B级15例;体力状况(ECOG)评分:0分47例,1分22例,2分5例,3分3例;肿瘤直径:≥5 cm 61例,<5 cm 16例;病灶数量:单发45例,多发32例;巴塞罗那(BCLC)分期:A期41例,B期17例,C期19例。

纳入标准:①所有患者均经临床评估、影像学检查、病理检查明确诊断为原发性肝细胞癌,存在肝炎后肝硬化病史;②所有患者均进行肝癌切除手术,术前未接受任何抗肿瘤治疗;③所有患者术后自愿接受随访,且随访资料完整。排除标准:①患有继发转移性肝癌、恶性肿瘤的患者;②存在严重感染、血液系统疾病的患者;③处于妊娠期、哺乳期的患者。本次研究已通过医院医学伦理委员会的批准。所有患者均自愿签署了知情同意书。

1.2方法

1.2.1仪器、试剂盒  试剂盒包括miRNA提取分离试剂盒及扩增试剂盒,仪器主要包括荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪。

1.2.2肝癌组织标本中miRNA提取方法  采用miRNA提取分离试剂盒,按照标签的加入量,加入无水乙醇去盐的漂洗液(RW)、去蛋白液的漂洗液(MRD)中。注意采集的癌组织与正常肝组织应距离3 cm以上。

1.2.3检测方法  应用逆转录和实时荧光定量PCR法进行检测,逆转录miR-375、U6;逆转录体积为155 μl,在42℃的条件下孵育30 min,在85℃的条件下孵育5 min。之后进行实时荧光定量PCR,得到循环阈值(Ct),内参为U6,以2-ΔΔCt法计算miR-375的相对表达量。

1.3观察指标及评价标准

观察肝癌患者的miR-375表达情况以及临床病理参数情况,通过相关性分析探讨miR-375表达情况与临床病理参数之间的关系。

肝功能Child-Pugh分级是一种对肝硬化患者肝脏储备功能进行评估的分级标准,等级越高,提示患者的肝脏储备功能越差,预后越差。ECOG评分,是从患者的体力来了解其一般健康状况和对治疗耐受能力的指标。ECOG体力状况评分分值越低,提示患者的体力状况越好。BCLC分期是一种肝癌临床分期系统,A期是指早期,B期是指中期,C期是指晚期。

1.4统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析;采用Pearson系数进行相关性分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 miR-375表达情况

77例肝癌患者的癌组织中miR-375相对表达水平为(4.50±1.38),癌旁正常组织中的miR-375表达水平为(13.67±3.52)。患者的癌组织中miR-375相对表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=21.283,P=0.001)。

2.2肝癌组织miR-375表达水平与患者临床病理参数的关系

不同性别、年龄、肝功能Child-Pugh分级、ECOG评分、病灶数量、BCLC分期肝癌组织中的miR-375相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但肿瘤直径≥5 cm肝癌組织中的miR-375相对表达水平低于肿瘤直径<5 cm,差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

2.3 miR-375相对表达水平与肝癌肿瘤直径的相关性分析

Pearson相关性分析结果显示,miR-375相对表达水平与肝癌肿瘤直径成负相关(r=-4.521,P<0.05),即miR-375相对表达水平越低,肿瘤直径越大。

3讨论

miRNAs是在真核生物中发现的一类内源性的、具有调控功能的非编码RNA,其参与了各种各样的调节途径,包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等[4-6],其通过结合靶基因3端非翻译序列来对靶基因降解、抑制目标mRNA翻译过程进行抑制,进而对靶基因表达进行抑制[7];其还能对丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路、促癌基因(IGF)-Ⅱ和肿瘤细胞胰岛素样生长因子受体(ICF-IR)表达等调节肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡进行调控[8-9],与肿瘤的发生、发展存在密切关系。

miR-375是一种抑癌基因,其与多种恶性肿瘤的发生、发展以及预后存在密切的关系[10-11]。miR-375在恶性肿瘤中呈低水平表达会促进恶性肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭以及转移,临床将miR-375作为癌症治疗靶点以及判断预后的重要标志之一[12],在癌症治疗中具有重要意义。以往认为miR-375能够调节胰岛细胞发育和胰岛素分泌,之后发现miR-375在消化系统、泌尿生殖系统、妇科、口腔等肿瘤组织中呈低表达,且均比癌旁组织中的miR-375表达水平低,少数肿瘤组织的miR-375表达水平高于癌旁组织[13]。通过分析发现,miR-375具有诸多的作用:①其可以抑制肝癌新生血管的生成[14]:miR-375过表达会导致新生血管管腔形成密度减少;同时减少微血管出芽数目,进而能够对细胞的增殖、克隆形成、迁徙或侵袭能力进行抑制。②miR-375可对肝癌细胞中血小板源性生长因子(PDGFC)的表达进行抑制,miR-375过表达、下调表达可对PDGFC基因表达进行有效抑制、促进[15]。③miR-375在血小板源性生长因子非编码端(PDGFC3′-UTR)上特异性靶位点沉默PDGFC基因上直接作用,进而对PDGFC基因表达进行抑制,且能够抑制肿瘤细胞在低氧状态下清除损伤的线粒体。miR-375同PDGFC基因在肝癌组织中的表达为负相关[16-17],能够对肝癌细胞的生长进行抑制miR-375通过靶向关键性的自噬相关分子抑制了低氧诱导的肝癌细胞的自噬[18-19],并削弱其在低氧状态下的活性,说明通过调控miR-375干预低氧状态下肝癌细胞的自噬有望成为一种潜在的抗肝癌新策略。

本研究结果显示,77例肝癌患者的癌组织中miR-375相对表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),提示癌旁正常组织中的miR-375充分发挥了抑癌作用,可阻止肿瘤细胞血管的生成。另外本研究结果还显示,不同性别、年龄、肝功能Child-Pugh分级、体力状况(ECOG)评分、病灶数量、巴塞罗那(BCLC)分期的肝癌组织中的miR-375相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤直径≥5 cm的肝癌组织中的miR-375相对表达水平低于肿瘤直径<5 cm,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-375相对表达水平与肝癌肿瘤直径成负相关(r=-4.521,P<0.05)。这是因为miR-375水平的降低会导致肿瘤细胞的增殖、分化,无法较好地抑制肿瘤细胞向周围正常组织侵袭、转移,因此会增加肿瘤体积和直径。徐晓宏等[20]在其文章中提到,miR-200a、miR-148b、miR-375在原发性肝癌组中的表达水平显著下调,且miR-375会对p53、p21、PTEN等重要生物学途径产生影响。本研究还发现,随着乙肝表面抗原(HBsAg)表达水平的升高,miR-375表达水平会随之下降,另外在肝癌的诊断中,血清miR-375的诊断敏感性、特异性比癌抗原19-9(CA19-9)高。结合本研究结果,可知调高miR-375表达水平有助于手术治疗效果的提高,能够有效抑制肿瘤细胞的生长,从而降低复发率;当肝癌患者体内抑癌基因miR-375表达水平降低时,可通过分子靶向治疗来恢复患者体内组织的miR-375正常表达量,有助于患者生存期的延长,可将其作为肿瘤的治疗靶点之一。

综上所述,miR-375在肝癌中呈低表达水平,参与了肝癌的发生与发展,通过检测miR-375水平,可为临床治疗、诊断、预后判断提供有效的帮助。但本次研究中由于随访时间短,未对miR-375表达水平与肝癌患者生存率的关系进一步研究,有待于今后进行考察。

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(收稿日期:2019-04-19  本文编辑:孟庆卿)

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