【摘要】 目的：探討分析手足口病（HFMD）继发细菌感染患儿检测降钙素原、超敏C反应蛋白及白细胞介素-6的临床意义。方法：选取2016年1月-2017年4月本院收治的HFMD初诊患儿100例，根据其有无细菌感染分为对照组和研究组，对照组为HFMD未并发感染组，研究组为HFMD继发细菌感染患儿，对比分析检测两组的降钙素原（PCT）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）及白细胞介素-6（IL-6）。结果：研究组患儿的hs-CRP和IL-6水平均高于对照组（P<0.05），但两组PCT比较差异无统计学意义（P>0.05）；研究组PCT、hs-CRP和IL-6的阳性检出率均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；对研究组PCT、hs-CRP和IL-6诊断的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.912、0.764和0.833，临界值为0.062 ng/mL、10.490 mg/L和15.870 pg/mL，诊断的特异度为95.5%、79.9%和72.1%，灵敏度为82.1%、73.9%和85.1%。PCT的特异度最高，诊断价值最大，IL-6的灵敏度最高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：在对HFMD继发细菌感染患儿的诊断中，HFMD继发细菌感染患儿PCT、hs-CRP和IL-6水平均增高，根据ROC曲线显示PCT的特异度最高，诊断价值最大，IL-6的灵敏度最高，三个指标均可以作为诊断标准，值得推广和应用。
【关键词】 手足口病； 继发细菌感染； 降钙素原； 超敏C反应蛋白； 白细胞介素-6； 临床意义
Clinical Significance of Procalcitonin，Hypersensitivity C Reactive Protein and Interleukin-6 in Children with Hand Foot Mouth Disease Secondary to Bacterial Infection/YU Qingyuan，LIU Jie.//Medical Innovation of China，2017，14（35）：009-013
【Abstract】 Objective：To investigate the clinical significance of procalcitonin，high sensitivity C reactive protein and interleukin-6 in children with HFMD secondary to bacterial infection.Method：From January 2016 to April 2017 in our hospital diagnosed 100 cases of children with HFMD secondary to bacterial infection were divided into the control group and the study group，the control group was HFMD without secondary to bacterial infection group，the study group was HFMD secondary to bacterial infection，procalcitonin（PCT），high sensitive C reactive protein（hs-CRP） and interleukin-6（IL-6） of two groups were detected and analyzed.Result：IL-6 and hs-CRP of the study group were higher than those of the control group（P<0.05），but there was no significant difference of PCT between two groups（P>0.05）.The positive rate of PCT，hs-CRP and IL-6 of the study group were significantly higher than those of the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The diagnosis of ROC area under the curve（AUC） of PCT，hs-CRP and IL-6 in the study group were 0.912，0.764 and 0.833，the critical value were 0.062 ng/mL，10.490 mg/L and 15.870 pg/mL，the specificity were 95.5%，79.9% and 72.1%，the diagnostic sensitivity were 82.1%，73.9% and 85.1%.PCT had the highest specificity and diagnostic value of maximum，the sensitivity of IL-6 was the highest，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：In the diagnosis of HFMD in children with secondary bacterial infection，PCT，hs-CRP and IL-6 levels increase，according to the ROC curve of PCT showes the highest specificity and diagnostic value of maximum sensitivity of IL-6 is the highest，three indexes can be used as diagnostic criteria，is worthy of promotion and application.
【Key words】 HFMD； Secondary bacterial infection； Procalcitonin； High sensitivity C reactive protein； Interleukin-6； Clinical significance
First-author’s address：Wuhan University School of Basic Medical Sciences，Wuhan 430000，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.35.003
手足口病（HFMD）常见于5岁以下的婴幼儿，主要由肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒引起，处于这个年龄段的婴幼儿由于免疫力比较低下，所以很容易出现细菌感染。从临床症状上无法判断其是否存在细菌感染，临床上常用的方法是对细菌进行分离培养来检测细菌感染，但是这种检测方法存在的最大缺点是检测的结果报告需要3～5 d，时程太长，缺乏灵敏度，这样会影响到对患儿的快速诊断和治疗[1]。目前，对血清降钙素原（PCT）进行检测可以作为诊断其是否具有细菌感染的依据，PCT是一种前肽降钙素[2]。除了PCT可以作为检测细菌感染的指标外，白细胞介素-6（IL-6）和超敏C反应蛋白（hs-CRP）也可以作为是否存在细菌感染的检测指标。本研究对HFMD继发细菌感染患儿联合检测PCT、hs-CRP及IL-6的临床意义进行分析，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2016年1月-2017年4月本院收治的HFMD初诊患儿100例作为研究对象。纳入标准：所有患者均符合HFMD诊疗指南标准（2010年版）[3]；年龄小于12周岁；患者均进行病原体和血清的培养，确诊是否存在细菌感染；临床资料完整。排除标准：并发有其他自身免疫性疾病的患儿；有消化道和呼吸道感染病史的患儿；入院前用过糖皮质激药物和免疫抑制剂的患儿；不配合检测的患儿[4]。两组患者均知情同意本研究，并经过医院伦理委员会批准。依据其是否感染细菌分为对照组和研究组，每组50例。对照组，男27例，女23例，年龄7个月～8岁，平均（3.94±0.85）岁，住院时间4～9 d，平均（6.13±0.34）d。研究组，男26例，女24例，年龄8个月～7岁，平均（3.17±0.81）岁，住院时间5～9 d，平均（7.01±0.25）d。两组患儿性别、年龄和住院时间等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法 两组患儿均在入院后空腹状态下使用抗生素治疗之前静脉采血3 mL，然后放置于真空的分离胶管内，取血清检测患儿的PCT、hs-CRP和IL-6。（1）PCT：把采集的血氧标本依据3500 r/min进行离心，时间为10 min，采用的是自动平衡离心机（北京雷伯尔LDZS-2），离心结束后，在全自动免疫的荧光分（miniVIDAS法国生物梅里埃）的屏幕上，选择Status S Green，并选择A或B仓位[5]。选择好仓位后输入位置1，并且按Assay到Select Assay，然后选择PCT，这时需要输入标本的号码，并且回车转入到下一个位置，放入PCT的试剂条，并把离心好以后的200 μL标本血清放入相对应的试剂条孔里面。这时就可以按开始键，开始自动检测，检测时间需要20 min，并且要将检测数据打印出来，进行记录[6]。（2）IL-6：将血液标本在常温下离心10 min 3000 r/min，然后选取上清液1 mL放入-80 ℃进行冰冻保存，等待检测。检测时需要采用酶联免疫吸附法（ELISA）用试剂盒来对血清IL-6进行检测，试剂盒的使用要依照说明书来进行[7]。
（3）hs-CRP：把采集的血清标本用免疫速率散射比浊法来进行检测，使用的是特定蛋白分析仪以及配套的试剂盒（IMMAUE800 贝克曼公司生产），然后对检测结果进行记录。
1.3 观察指标 通过检测患儿血清的PCT、
hs-CRP及IL-6，对比分析两组患者的PCT、hs-CRP
和IL-6水平以及阳性检出率，并分析PCT、
hs-CRP和IL-6对诊断HFMD继发细菌感染的价值。PCT≥0.50 ng/mL为阳性；hs-CRP>8.00 mg/L為阳性；IL-6>10.00 pg/mL为阳性。使用ROC曲线评估各个指标诊断细菌感染的效果。
1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，非正态分布计量资料用中位数四分位数间距[M（P25，P75）]表示，比较采用Mann-Whitney U 检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患儿的PCT、hs-CRP和IL-6水平比较 研究组患儿的IL-6和hs-CRP水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），但两组PCT比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.2 两组患者的PCT、hs-CRP和IL-6阳性检测率对比 研究组患者的hs-CRP、PCT和IL-6的阳性检测率均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.3 PCT、hs-CRP和IL-6对HFMD继发细菌感染的诊断价值 PCT的曲线下面积最大，特异度最高，IL-6的灵敏度最高，差异有统计学意义（P<0.05），见图1和表3。
3 讨论
HFMD是由病毒通过多种途径进行传播而引起的，主要有肠道病毒71（EV71）和柯萨奇病毒A16（CVA16），是一种儿童急性传染性疾病，临床表现为发热以及手足口等部位出现皮疹等[8]。多见于婴幼儿，大多数患儿症状比较轻，均为自限性疾病，经过治疗后一般均可痊愈。但是还有少部分病症比较严重的患儿，自身的免疫力和抵抗力比较低，会出现继发性的细菌感染，如皮肤黏膜和呼吸道感染等，会影响到疾病的恢复，并且延长了病程[9]。目前，针对手足口疾病的治疗缺少有效的治疗手段和特异性疫苗，所以在治疗中主要是抗病毒和加强免疫力，对于继发细菌感染的患儿进行抗感染治疗[10]。早期判断患儿是否存在继发细菌性感染很重要，临床上比较常见的是采用实验室的指标CRP和白细胞数（WBC）为标准，采用病原菌培养进行鉴定，但是存在很多缺点，这种细菌培养的周期比较长，并且不同的实验室对阳性率的培养存在很大的差异，灵敏度也不高，会影响到患儿的诊断和治疗[11]。所以随着科技的发展，很多实验室都通过检测患者血清中的因子与感染情况进行诊断。本研究就采用联合PCT、hs-CRP及IL-6的检测对HFMD继发细菌感染患儿进行诊断。
細菌感染患儿的特征一般是体温升高、白细胞计算增加，hs-CRP和中性粒细胞所占比例均会升高，在很多临床实践中发现了患儿的白细胞计数的正常范围比较宽，很多患儿的白细胞计数虽然比较低，但是升高后也不会超出正常的范围值[12]。白细胞计数的影响因素有很多，如高温、情绪和寒冷等，在没有出现细菌感染的情况下，出现高热也会导致患者体内白细胞计数升高。所以体温以及白细胞计数的升高很多时候是由于高温以及其他应激因素产生的，不能作为判断是否存在细菌感染的依据[13]。C反应蛋白是一种急性时反应相蛋白，主要发生在微生物入侵或者机体发生组织损伤时出现的炎症，从而产生刺激而促使肝细胞合成的。hs-CRP和
C反应蛋白其实属于同一种物质，只不过hs-CRP的敏感性进行检测时用的方法不同[14]。hs-CRP也是一种急性时反应相蛋白，是非特异性的炎症指标，在患者发生细菌感染时会对肺巨噬细胞以及单核细胞进行激活，由此释放一些炎性细胞因子，然后使机体内的免疫功能和抗感染的免疫反应均出现了很大的变化，促使了巨噬细胞对细胞粘附分子以及细胞因子的表达，实现对hs-CRP的诱导合成，从而hs-CRP的水平就出现了升高的趋势 [15]。除此以外，hs-CRP水平升高的情况还会在患者出现手术、创伤、心肌梗死、应激、肿瘤浸润等，单一的对其进行检测，可能不能提供一些有价值的相关信息。本研究是通过对hs-CRP和PCT、IL-6的联合检测，对是否存在细菌感染是具有一定价值的。PCT作为新型的一种炎性指标，是由氨基酸116种组成的，糖蛋白的分子量为12 796 d，属于降钙素的前肽物质。PCT分布于人体内的甲状腺滤泡旁边的细胞内，并且是无激素活性的前肽物质，当没有发生感染的时候，它在人体的含量是非常少的，并且也就表达与肺中枢以及甲状腺的分泌细胞内[16]。但是当发生细菌感染后，它就会实现对身体的各种组织进行诱导，达到很多类型的细胞都连续性的进行释放，如肠道和非组织的淋巴细胞、肝脏内的单核细胞和巨噬细胞、神经内分泌的细胞等。PCT水平在发生细菌感染后4 h会出现迅速升高，6～8 h会到达最高峰，但是在之后的24 h内会保持持续稳定的升高。PCT的升高除对细菌感染有敏感性外，对晚发型以及早发型的败血症也有很高的特异度和灵敏性[17]。IL-6可以实现调节人体内的很多细胞的生长以及分化，并且对急性期的反应、造血功能以及免疫应答都可以实现调节，主要是由T细胞、巨噬细胞和B细胞等产生的。IL-6是一种重要的炎性调节和递质因子，在机体内对免疫反应和抗感染会起到很好的作用，对抗病毒具有重要的意义。IL-6水平一般在患儿机体出现细菌感染后的几个小时内达到最高峰，可以作为细菌感染诊断标准之一[18]。本研究结果表明，HFMD继发细菌感染患儿的hs-CRP和IL-6水平均明显高于未感染细菌的HFMD患儿，从此得出研究组患儿因为存在继发细菌感染，所以机体就会发生对细菌感染的一种免疫反应，来维持正常生理功能实现稳定，所以IL-6和hs-CRP的水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），并且研究组患儿PCT、hs-CRP和IL-6的阳性检出率均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。
ROC曲线是可以准确地对某诊断实验和分析方法的特异度和灵敏度进行反映的，曲线下面积跟实验的价值成正比，曲线下面积越大，也就证明试验的诊断价值就越大[19]。通过研究表明，对研究组患儿进行的hs-CRP、PCT和IL-6进行诊断的ROC曲线中显示，患儿的PCT、hs-CRP和IL-6的曲线下面积（AUC）分别为0.912、0.764和0.833，临界值分别为0.062 ng/mL、10.490 mg/L和15.870 pg/mL，诊断的特异度为95.5%、79.9%和72.1%，诊断的灵敏度为82.1%、73.9%和85.1%。由此可见，对诊断HFMD继发细菌感染患儿的PCT、hs-CRP和IL-6指标中，IL-6的灵敏度是最高的，PCT的特异度最高，诊断的价值最大，这三个指标在诊断中均有一定的价值[20]。
综上所述，联合PCT、hs-CRP及IL-6的检测，具有很大的诊断价值，快速简单，并且结果可靠，是对HFMD患儿是否继发细菌感染的可靠诊断指标，值得推广和应用。
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（收稿日期：2017-07-24） （本文编辑：程旭然）
