烤烟叶对鲫鱼的毒性研究

材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验鱼缸。试验鱼缸6个，规格：长×宽×高为1.2 m×0.6 m×0.7 m。

1.1.2 恒温棒。柏卡乐牌自动恒温棒，额定电压220～240 V，额定频率50～60 Hz，额定功率500 W，用于恒定试验过程中试验水体温度，保证各试验水体水温一致。

1.1.3 增氧设备。松宝SB-988增氧泵，额定电压220～240 V，额定频率50～60 Hz，额定功率12 W，出气量4×4 L/min。使用增氧泵是为了使试验过程中试验水体有充足的溶氧，保证试验鱼不受缺氧干扰意外死亡。

1.1.4 试验水源。试验水源采用饮用自来水。

1.1.5 供试鱼类。品种为2龄鲫鱼，平均尾重（148±5）g；1龄鲫鱼鱼苗，平均尾重（25.3±2.0）g。

1.1.6 供试烤烟叶。试验用烤烟叶为去年收集的当年废弃的等级外烤烟叶，收集后用塑料袋密封保存。

1.1.7 电子天平。称量用电子天平为上海舜宇恒平科学仪器有限公司生产的FB224电子天平，技术参数为Max：220 g、e：1 mg、Min：0.01 g、d：0.1 mg；电源：DC 12 V 1 000 mA；功耗：12 VA。

1.2 试验方法

相同水源水质、相同水温条件下，利用同一品种不同规格、同一规格不同给药方法，在不同浓度梯度下进行试验。

1.2.1 试验水质处理。试验的前1 d把自来水分别注入试验的6个鱼缸，放入恒温棒，把温度调节到22 ℃，同时向每个试验鱼缸中放入2个增氧泵气石，并打开增氧泵，进行曝气，消除自来水中残留的有效氯，每次试验前统一曝气12 h。

1.2.2 烤烟叶给药方法。①浸泡法：在试验前把烤烟叶浸泡在水中一段时间后，过滤除去烤烟叶，用水溶液对148 g 2龄鲫鱼进行毒性试验。浸泡方法是按1∶10的比例浸泡，把500 g烤烟叶放入5 000 g的水中浸泡24 h，过滤后及时使用。试验设计浓度为120、126、131、136、141、146 g/m3。②挂袋法：把烤烟叶装入袋子中，直接放入试验鱼缸，对148 g 2龄鲫鱼和25.3 g 1龄鲫鱼进行毒性试验，此种方法简单方便，在生产实践中应用广泛。方法为用40目筛网制作成15 cm×20 cm的袋子，根据梯度浓度计算烤烟叶用量，称量后放入袋子直接放入鱼缸。为保证药袋及时沉入水中，在药袋中放入一小石块。试验设计浓度分别为106、111、116、121、126、131 g/m3和91、96、101、106、111、116 g/m3。

1.2.3 烤烟叶加工。因为每次试验，每一个试验鱼缸使用的烤烟叶数量较小，为了减少烤烟叶质量差异对试验结果的影响，在试验之前把烤烟叶人工切割加工成2 cm×2 cm的烤烟叶碎块，再把加工好的烤烟叶碎块混合搅拌均匀，然后装入大塑料袋密封待用。

1.2.4 增氧。使用雷磁JPB-607A型溶解氧测定仪，定期测定试验水体含氧量并及时增氧，使溶解氧保持在5～6 mg/L之间。

1.2.5 试验实施。①预备试验：从7.5 g/m3开始通过14个梯度找出了鲫鱼出现死亡及全部死亡的浓度范围。②正式试验：根据预备试验结果按相等间距梯度开展烤烟叶对鲫鱼的毒性试验，每个鱼缸水量0.4 m3、鱼数10尾，水温22 ℃，试验观察时间96 h，统计死亡数量，用Bliss法计算LC50值。试验中定期监测水温和溶解氧，使水温保持22 ℃，溶解氧保持在5～6 mg/L之间。

1.3 评价计算方法

1.3.1 半数致死量计算（Bliss法）。试验中半致死量的计算是采用半致死量（LC50）Bliss法的评价与计算[4]，通过Bliss法分别计算出烤烟叶对鲫鱼的96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95值。

1.3.2 安全浓度计算。安全浓度计算是根据Bliss法得出的烤烟叶对鲫鱼的96 h LC50（半致死浓度），按照安全浓度（satfety concentration，SC）经验公式，即安全浓度（SC）=96 h LC50×0.1，计算出试验烤烟叶对鲫鱼的安全浓度。

2 结果与分析

2.1 规格为148 g 2龄鲫鱼浸泡法试验

采用浸泡法，对平均尾重为148 g的2龄鲫鱼开展烤烟叶浸泡溶液毒性试验，结果见表1。根据浸泡法不同浓度对平均尾重为148 g的2龄鲫鱼进行攻毒试验后得出的死亡情况，按照Bliss法计算96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95值，并根据安全浓度经验公式计算安全浓度。

回归方程y（Probit）=-80.025+40.051 log（D）。半数致死量LC50=132.71 g/m3，LC50（Feiller校正）95%的可信限为129.36～136.94 g/m3，LC5=120.74 g/m3，LC95=145.87 g/m3，安全浓度SC=13.3 g/m3。

2.2 规格为148 g 2龄鲫鱼挂袋法试验

采用挂袋法，对平均尾重为148 g的二龄鲫鱼开展烤烟叶浸泡溶液毒性试验，试验结果见表2。根据挂袋法不同浓度对平均尾重为148 g的2龄鲫鱼进行攻毒试验后得出的死亡情况，按照Bliss 法计算96 h LC5、96 h LC50、96 h LC95 值，并根据安全浓度经验公式计算安全浓度。

回归方程y（Probit）=-70.14+36.213 log（D）。半数致死量LC50=118.84 g/m3，LC50（Feiller校正）95%的可信限为115.64～122.11 g/m3，LC5=107.03 g/m3，LC95=131.94 g/m3，安全浓度SC=11.9 g/m3。

2.3 规格为25.3 g 1龄鲫鱼挂袋法试验

采用挂袋法，对平均尾重为25.3g的1龄鲫鱼开展烤烟叶浸泡溶液毒性试验，结果见表3。

回归方程y（Probit）=-64.753+34.566 log（D）。半数致死量LC50=104.23 g/m3，LC50（Feiller校正）95%的可信限为101.21～107.34 g/m3，LC5=93.409 g/m3，LC95=116.3 g/m3，安全浓度SC=10.4 g/m3。

2.4 不同给药方式、不同规格鲫鱼的LC5、LC50、LC95及安全浓度值对比

不同给药方式、不同规格鲫鱼的LC5、LC50、LC95及安全浓度值对比见图1。不同给药方式、不同规格的鲫鱼，其LC5、LC50、LC95各不相同。同一给药方式（挂袋法），鱼体规格越小其耐药性越低，即随着鱼体规格的变小，烤烟叶对鲫鱼的毒性96 h内致死浓度、半致死浓度、全部死亡浓度及安全使用浓度逐步降低；相同鱼体规格浸泡法烤烟叶对鲫鱼的96 h内致死浓度、半致死浓度、全部死亡浓度及烤烟叶安全使用浓度大于挂袋法。

3 结论与讨论

3.1 在稳定的试验环境下，不同规格鲫鱼、不同给药方式的96 h LC50值各不相同

当水温维持在（22.0±0.2）℃，溶解氧為5～6 mg/L时，浸泡法148 g 2龄鲫鱼的96 h LC50为132.71 g/m3，96 h LC5为（下转第226页）

（上接第223页）

120.74 g/m3，96 h LC95为145.87 g/m3；挂袋法148 g 2龄鲫鱼的96 h LC50为118.84 g/m3，96 h LC5为107.03 g/m3，96 h LC95为131.94 g/m3；25.3 g 1龄鲫鱼的96 h LC50为104.23 g/m3， 96 h LC5为93.41 g/m3，96 h LC95为116.3 g/m3。

3.2 小规格鱼体的耐药性低于大规格鱼体

采用相同的给药方法（挂袋法），发现148 g 2龄鲫鱼的96 h LC50值（118.84 g/m3）大于1龄鲫鱼的96 h LC50值（104.23 g/m3），说明小规格鲫鱼对烤烟叶的耐药性低于大规格鲫鱼[5-6]。

3.3 浸泡法96 h LC50值大于挂袋法

相同规格的鲫鱼（148 g 2龄鲫鱼），采用浸泡法其96 h LC50为132.71 g/m3；采用挂袋法，其96 h LC50为118.84 g/m3，浸泡法96 h LC50值大于挂袋法的96 h LC50值。因为浸泡时烤烟叶与水的比例为1∶10，药物有效成分不能全部释放在水中，还有部分残留在烤烟叶中，导致不同给药方式的96 h LC50值不一致。

3.4 不同给药方式、不同规格鲫鱼的安全浓度

水温在（22.0±0.2）℃、溶解氧在5～6 mg/L之间时，浸泡法148 g 2龄鲫鱼的安全浓度为13.3 g/m3；采用挂袋法的148 g 2龄鲫鱼安全浓度为11.9 g/m3，25.3 g 1龄鲫鱼的安全浓度为10.4 g/m3。

4 参考文献

[1] 李时春.烟叶防治鱼病探讨[J].攀枝花学院学报，2004（5）：92-95.

[2] 陈修春.烟叶防治鱼病技术[J].现代农业科技，1995（10）：22.

[3] 吴意孙.巧用烟叶防治鱼病[J].中国水产，2006（10）：55.

[4] 黎七雄，汪辉，肖清秋，等.半数致死量（LD50）Bliss法的评价及计算[J].数理医学杂志，1995（4）：318-320.

[5] 吴意孙.巧用烟叶防治鱼病二例[J].福建农业，2008（2）：25.

[6] 褚新梅.烟叶在鱼病防治中的应用[J].河北渔业，2006（7）：56.

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