下面是小编为大家整理的三种HPV-DNA检测法筛查高危型HPV感染中应用效果,供大家参考。
《当代医药论丛》 Contemporary Medical Symposium
2021 年 第 19 卷
第 12 期 ·检测与诊断· 129三种HPV-DNA检测法在筛查高危型HPV感染中的应用效果陆妹英（柳州市工人医院，广西 柳州 545005）[ 摘要 ] 目的 ：探讨三种 HPV-DNA 检测法在筛查高危型人乳头状瘤病毒（HPV）感染中的应用效果。方法 ：选取 2019 年 1 月至 2020 年 10 月期间在柳州市工人医院接受妇科检查的 21 965 例受检者作为研究对象。按照检测方法的不同将这 21 965 例受检者分为杂交捕获 - 化学发光法（DH3 法）组（n=12 648）、HPV 原位杂交法组（n=5）和实时荧光定量 PCR 法组（n=9312）。对 DH3 法组受检者使用 DH3 法进行 HPV-DNA 检测，对 HPV 原位杂交法组受检者使用 HPV 原位杂交法进行 HPV-DNA 检测，对实时荧光定量 PCR 法组受检者使用实时荧光定量 PCR 法进行 HPV-DNA 检测。对三组受检者中 HPV-DNA 检测结果呈阳性者均进行阴道镜活检。然后，观察三组受检者进行阴道镜活检结果与进行 HPV-DNA 检测结果的符合率。结果 ：进行阴道镜活检的结果显示，DH3 法组中高危型 HPV 感染者有 546 例，HPV 原位杂交法组中高危型 HPV 感染者有 5 例，实时荧光定量 PCR 法组中高危型 HPV感染者有 332 例。DH3 法组受检者阴道镜活检结果与 HPV-DNA 检测结果的符合率为 89.22%，HPV 原位杂交法组受检者阴道镜活检结果与 HPV-DNA 检测结果的符合率为 100%，实时荧光定量 PCR 法组受检者阴道镜活检结果与 HPV-DNA 检测结果的符合率为 93.26%。结论 ：使用 DH3 HPV-DNA 检测法、HPV 原位杂交 HPV-DNA 检测法和实时荧光定量 PCR HPV-DNA 检测法筛查高危型 HPV 感染均具有较高的应用效果。与应用 HPV 原位杂交 HPV-DNA 检测法和实时荧光定量 PCR HPV-DNA 检测法相比，用 DH3 HPV-DNA 检测法筛查高危型 HPV 感染更为简单、方便、快捷，更适用于对 HPV 感染进行大范围的筛查。[ 关键词 ] 杂交捕获 - 化学发光法 ；HPV-DNA 检测 ；高危型人乳头状瘤病毒感染[ 中图分类号 ]R446 [ 文献标识码 ]B [ 文章编号 ]2095-7629-（2021）12-0129-02勒超声检查是临床上妇产科常用于预测母婴预后的一种影像学方法。对孕妇进行彩色多普勒超声检查，可通过获取的血流频谱详细了解其胎盘功能，通过监测其胎儿脐动脉、大脑中动脉的血流动力学指标准确了解其胎儿的宫内状况。大脑中动脉是维持胎儿大脑血液供应的主要血管。胎儿在宫内发育的过程中其大脑需要大量营养，其大脑中动脉对缺氧十分敏感，一旦发生宫内缺氧，其大脑中动脉周围的血管发生收缩，导致其血管的阻力上升，其脑血管可发生代偿性扩张，缓解其血管阻力，增加其血流量，以维持其大脑血液的供应（即脑保护效应）。与静脉分流和脐动脉血流动力学相比，监测孕妇胎儿大脑中动脉的血流动力学指标，可准确反映其宫内氧气的状况。但有研究认为[5] ，孕妇胎儿若宫内缺氧持续存在且越发严重，其处于失代偿期时大脑中动脉的 RI 会逐渐上升，甚至上升至正常范围。这一现象的发生是因为宫内缺氧导致孕妇胎儿出现脑组织水肿，其大脑中动脉的 RI 下降已无法满足其脑组织的供氧，因此其大脑中动脉的 RI 会上升。这说明，单独监测孕妇胎儿大脑中动脉的血流动力学指标，不能作为诊断其是否发生宫内缺氧的准确依据。监测孕妇胎儿脐动脉的血流动力学指标，可反映其胎儿 - 胎盘循环系统的血流状态。对孕妇进行彩色多普勒超声检查，可测量其胎儿脐动脉的 RI、PI 及S/D 的比值等血流动力学指标，了解其胎盘血管的阻力，反映其宫内血氧供应的状况。孕妇胎儿脐动脉的血流动力学指标与母体体质不同、胎儿个体差异等有关。单独监测孕妇胎儿脐动脉血流动力学指标的敏感性较低[6] 。随着孕妇胎儿的生长发育，其脐动脉的血流动力学指标可发生改变。对孕妇的血流频谱进行监测，可明确其胎盘 - 胎儿循环系统功能的病理变化。依据上述孕妇胎儿各项血流动力学指标的情况可预测其胎儿是否发生宫内缺氧[7] 。综上所述，对孕妇进行彩色多普勒超声检查，可明确其胎儿脐动脉、大脑中动脉的血流动力学指标，可为诊断其胎儿是否发生宫内缺氧提供参考依据。参考文献[1] 夏春华 , 曾华北 , 郑艳芬 , 等 . 三维成像及 H-Flow 技术结合彩色多普勒超声评价胎儿宫内缺氧状况的研究 [J]. 医学影像学杂志 ,2018,28(2):303-307.[2] 孙晖 , 韩丽丽 , 李朝霞 , 等 . 临床妇产科学 [M]. 天津 : 天津科学技术出版社 ,2011:58-59.[3] 郭琳娜 , 柴义青 , 黄帆 , 等 . 多普勒超声诊断胎儿宫内缺氧的大样本分析 [J]. 天津医药 ,2018,46(4):406-410.[4] 王晓影 , 刘奇 . 脐动脉和大脑中动脉血流频谱诊断胎儿宫内缺氧的价值分析 [J]. 北京医学 ,2020,42(12):1206-1209.[5] 李慎 , 李亚宏 , 丁利霞 . 超声测定脐血流 S/D 值对诊断胎儿宫内缺氧的临床价值 [J]. 贵州医药 ,2019,43(7):1152-1153.[6] 聂春梅 . 脐血血气指标 ã 脑血流动力学检测及 Apgar 评分评估缺血缺氧性脑病高危患儿预后的意义 [J]. 中国妇幼保健 ,2017,32(17):4177-4180.[7] 仇萌萌 , 李功璐 . 彩超参数 MCAãUA 联合胎心监护预测胎儿宫内缺氧的模型分析 [J]. 影像科学与光化学 ,2020,38(4):621-625.宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。相关的调查数据显示，宫颈癌的发病率排在全球女性恶性肿瘤发病率的第四位。宫颈癌患者在发病的初期无特异性症状，其病情易被误诊为其他疾病。多数此病患者的病情被确诊时往往已经进展至中晚期，进而延误了治疗的时机[1] 。对宫颈癌患者的病情进行早期筛查及确诊对改善其预后具有重要的意义。大量的流行病学及分子生物学研究结果显示，持续存在的高危型人乳头状瘤病毒（HPV）感染是导致宫颈癌及宫颈癌癌前病变的主要病因[2] 。HPV 是一种无包膜病毒，由 8000 个碱基对组成的双链环状 DNA 及正二十面体蛋白质衣壳组成。HPV 感染可分为黏膜表面感染和皮肤感染[3] 。本次研究主要探讨三种 HPV-DNA 检测法在筛查高危型HPV 感染中的应用效果。1 资料与方法1.1 一般资料本次研究的对象为 2019 年 1 月至 2020 年 10 月期间在柳州市工人医院接受妇科检查的 21 965 例受检者。这 21 965 例受检者均知晓本次研究的内容，并签署了参加本次研究的知情同意书。本次研究对象的排除标准是 ：1）临床资料不全者。2）中途退出本次研究者。这 21 965 例受检者的年龄为 19 ～ 99 岁，平均年龄为（65.6±9.4）岁。按照检测方法的不同将这 21 965 例受检者分为 DH3 法组（n=12 648）、HPV 原位杂交法组（n=5）和实时荧光定量 PCR 法组（n=9312）。本次研究获得了柳州市工人医院医学伦理委员会的批准。1.2 研究方法作者简介：陆妹英（1982—），女，壮族，百色人，本科学历，柳州市工人医院病理科常规组组长，主管技师
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第 12 期 ·检测与诊断· 130对 DH3 法组受检者使用 DH3 法进行 HPV-DNA 检测，方法是：1）采集受检者宫颈部位的脱落细胞作为检测标本。2）将检测标本滴入 DH3 HPV 核酸检测试剂盒的捕获微孔板中，严格按照试剂盒的质控要求进行操作。3）根据试剂盒底物的光强度判断 HPV-DNA 的数量。对 HPV 原位杂交法组受检者使用 HPV 原位杂交法进行 HPV-DNA 检测，方法是 ：1）用一次性宫颈软毛刷采集受检者宫颈部位的脱落细胞放入标本瓶中。2）用过滤器滤出细胞后移至载玻片上，采用三步法对细胞涂片进行染色。先在细胞涂片上加入地高辛抗体识别地高辛并标记靶点，再加入兔抗鼠抗体与地高辛抗体进行结合，然后加入辣根过氧化物酶检测试剂。将 3.3- 二氨基联苯胺（DAB）作为显色底物，对细胞涂片进行显色后，根据杂交信号的有无判断是否感染 HPV。当细胞核呈黄色、棕黄色或棕褐色着色、但细胞质和细胞膜无着色时即可判定 HPV 阳性。对实时荧光定量 PCR 法组受检者使用实时荧光定量 PCR 法进行 HPV-DNA 检测，方法是 ：1）采集受检者宫颈部位的脱落细胞作为检测标本。2）使用实时荧光定量 PCR 仪及配套试剂盒对检测标本进行HPV-DNA 检测。对三组受检者中 HPV-DNA 检测结果呈阳性者进行阴道镜活检，方法是 ：1）对受检者的阴道进行清洁、消毒后，使用活检钳咬取其可疑病变部位一定量的组织作为标本送至病理科。要求患者在采集标本前的 3 d 内无性交活动及阴道用药史，且处于非月经期。2）对组织标本进行切片、包埋、染色处理后，观察其细胞和组织的形态结构变化的情况。3）根据患者组织标本的细胞及组织形态结构，判定其是否发生 HPV 感染及 HPV 感染的程度[4] 。1.3 观察指标观察三组受检者进行阴道镜活检结果与进行 HPV-DNA检测结果的符合率。符合率﹦阴道镜活检高危型 HPV 感染的例数∕ HPV-DNA 检测阳性的例数 ×100%。1.4 统计学处理对本次研究中的数据均采用 SPSS 18.0 统计软件进行处理，计量资料用均数 ± 标准差（ s x ± ）表示，采用t 检验，计数资料用百分比（%）表示，采用 χ² 检验。以 P ＜0.05表示差异具有统计学意义。2 结果进行阴道镜活检的结果为，DH3 法组中高危型 HPV 感染者有 546 例患者，HPV 原位杂交法组中高危型 HPV 感染者有 5 例，实时荧光定量 PCR 法组中高危型 HPV 感染者有 332 例。DH3 法组受检者阴道镜活检结果与 HPV-DNA检测结果的符合率为 89.22%（546 ∕ 612），HPV 原位杂交法组受检者阴道镜活检结果与 HPV-DNA 检测结果的符合率为 100%（5 ∕ 5），实时荧光定量 PCR 法组受检者阴道镜活检结果与 HPV-DNA 检测结果的符合率为 93.26%（332 ∕ 356）。详见表 1。表 1 三组受检者检测结果的比较组别 例数HPV-DNA检测结果阳性（例）阴道镜活检高危型 HPV 感染（例）检测结果的符合率（%）DH3 法组 12 648 612 546 89.22HPV 原位杂交法组 5 5 5 100实时荧光定量 PCR 法组 9312 356 332 93.263 讨论相关的调查结果显示，有 90% 以上的宫颈癌患者是由高危型 HPV 感染所致[5] 。宫颈癌患者在发病的初期会出现接触性出血、阴道排液异味等症状，当其病情发展至中晚期还会出现不规则阴道流血及感染等症状。目前，临床上检测 HPV-DNA 的方法有 DH3 法、HPV 原位杂交法和实时荧光定量 PCR 法等。DH3 HPV 核酸检测试剂盒是一种快速HPV-DNA 检测试剂盒。该试剂盒中的变性试剂可使宫颈脱落细胞 HPV 的双链 DNA 变性分解成单链 DNA，单链 DNA可 与 特 异 性 RNA 探 针 结 合 为 DNA-RNA 杂 合 体，DNA-RNA 杂合体与捕获微孔板上的特异性抗体相结合后，与偶联碱性磷酸酶的抗 DNA-RNA 杂合体中的特异性抗体相结合后会在酶促反应下发光，然后观察者可根据底物的光强度判断 HPV-DNA 的数量。DH3 HPV 核酸检测试剂盒中的特异性 RNA 探针可与 HPV 的 14 种亚型相结合，形成 14种 DNA-RNA 杂合体，能够有效地避免假阴性及假阳性检测结果的产生，适用于对宫颈疾病的初步筛查及定性监测。HPV 原位杂交法主要是通过三步法对细胞涂片进行染色，再将 DAB 作为显色底物对细胞进行显色，然后根据杂交信号的有无判断是否感染 HPV，当细胞核呈黄色、棕黄色或棕褐色着色、但细胞质和细胞膜无着色时即可判定 HPV 阳性。HPV 原位杂交法可以准确定位 HPV 细胞，明确组织细胞中 HPV 的位置及感染的程度。但是，由于本次研究中HPV 原位杂交法组纳入的样本量较少，故未能准确地反映出 HPV 原位杂交法检测 HPV-DNA 的效果。实时荧光定量PCR 技术主要是利用 DNA 变性与复性原理，对宫颈脱落细胞进行特定的 DNA 片段高效扩增，特异性引物及探针分别与靶序列相结合，Taq 酶在引物的引导下复制靶序列，遇到结合 2 条引物之间的探针时发挥“5”游离端外切酶的功能，使探针水解形成游离羧基荧光素发射荧光，合成 HNA 链发射的荧光信号量的增加与序列指数的增长呈正相关。但是，使用实时荧光定量 PCR 法检测 HPV-DNA 时，不仅需要使用专用的实验室，而且对检测人员的技术要求较高，不适于作为普查 HPV 感染的检测方法[6] 。上述研究结果说明，与使用 HPV 原位杂交法和实时荧光定量 PCR 法相比，使用DH3 法进行 HPV-DNA 检测具有操作简便、无需 PCR 实验室、对操作人员无特殊资质要求、价格低廉等特点，适合在各医疗机构中推广应用。综上所述，使用 DH3 HPV-DNA 检测法、HPV 原位杂交 HPV-DNA 检测法和实时荧光定量 PCR HPV-DNA 检测法筛查高危型 HPV 感染均具有较高的应用效果。与应用 HPV 原位杂交 HPV-DNA 检测法和实时荧光定量 PCR HPV-DNA 检测法相比，用 DH3 HPV-DNA 检测法筛查高危型 HPV 感染更为简单、方便、快捷，更适用于对 HPV感染进行大范围的筛查。参考文献[1] 苏丽莉 , 陈默 . 叶酸受体介导的宫颈特殊染色法联合 TCT 检查和 HPV 检测法对宫颈病变的诊断价值 [J]. 国际检验医学杂志 ,2020,41(15):1853-1856. [2] 邵玮 , 李敬巍 . 宫颈薄层液基细胞学联合高危型人乳头瘤病毒检测对老年宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断价值分析 [J]. 老年医学与保健 ,2020,26(4):618-621.[3] 初虹 , 余志英 , 邢娟 , 等 .DNA 倍体细胞检测与宫颈液基细胞学检查在宫颈病变筛查中的应用 [J]. 海南医学 ,2020,31(14):1836-1839. [4] 赵连爽 , 马国强 , 杨金金 , 等 . 塔城地区女性人乳头瘤病毒感染情况及其与子宫颈病变的相关性 [J]. 中国医科大学学报 ,2020,49(10):929-934. [5] 陈静 , 陈煜岊 , 弋文娟 . 阴道镜子宫颈活组织检查对子宫颈癌前病变诊断的准确性及子宫颈癌漏诊影响因素分析 [J]. 肿瘤研究与临床 ,2020,32(8):579-583. [6] 王 会 军 , 王 威 , 董 建 华 . 高 危 型 人 乳 头 瘤 病 毒 联 合 液 基 薄层 细 胞 学 检 查 在 宫 颈 病 变 筛 查 中 的 应 用 效 果 [J]. 癌 症 进展 ,2020,18(13):1377-1380.
